Extracción de ADN con una muestra de la saliva:

Introducción

En esta practica vamos a intentar extraer el ADN de una muestra de saliva de uno de nosotros. El objetivo de esta practica es conseguir desenvolvernos en el laboratorio y realizar una primera toma de contacto con este, ademas de ver por primera vez el ADN en estado puro. Fundamentalmente nos vamos a basar en los principios de precipitación y lisis celular para lograr aislar el ADN deseado.

Protocolo

# Lisis Celular

# Precipitación proteica

# Precipitación del ADN

# Hidratación del ADN

Ejecución

Lo primero que hicimos fue tomar una muestra de saliva de nosotros y cogimos 2 ml de saliva,previamente había que pasar la lengua por toda la boca sobre todo mejillas y palatinos para así sacar la mayor cantidad de células posibles.

A continuación hicimos la lisis celular; es decir provocar la ruptura celular. Para ello cogimos 800 microlitro de saliva en un microtubo y lo pusimos a centrifugar durante durante 90 segundos a 16000 G, a continuación eliminamos el sobrante con una pipeta. Después añadimos 600 micro litro de tampon de Lisis y lo mezclamos con la propia pipeta a fin de lisar las células del Pellet. Luego incubamos la muestra durante 10 min y de vez en cuando movíamos esta para mejorar el rendimiento.

Una vez hecho esto, comenzamos la precipitación proteica; lo primero fue añadir a la mezcla 200 microlitros de tampon de precipitación de proteínas y meterlo en el Vortex a máxima velocidad durante 30 segundos. Luego tuvimos que centrifugar a 16000 G durante 5 min y repetirlo otra vez porque quedaron partículas suspendidas en la muestra, para acabar lo metemos en hielo durante otros 5 min.

Al acabar los 5 minutos que se enfría la muestra comenzamos con la precipitación del ADN; empezando por quitar el sobrenadante del ADN y añadiendo 600 microlitros a esta de Isoporpanol en un nuevo microtubo y mezclamos la muestra por inversión en una secuencia de 50 repeticiones. Luego centrifugamos a 16000G durante 2 minutos lo que provoco que el ADN se hiciera visible, era como un hilo color blanquecino.

Tras esto se nos acabo el tiempo de la clase y no pudimos acabar la practica totalmente, ya que hubo procesos que tuvimos que hacer varias veces. Se nos quedo pendiente añadirle el alcohol, centrifugar el resultado y finalmente invertir el resultado final.

Imágenes