Cultivo Celular De Células Eucariotas

Introducción

En estas prácticas, tenemos como objetivo introducirnos en el cultivo de células de insectos a través de un sistema barato y sencillo. Además de estudiar la viabilidad y el crecimiento celular. Utilizaremos nuevas técnicas aprendidas y nuevos aparatos como pueden ser las cámaras de recuento celular y por primera vez realizaremos un tinción de giensa, ademas perfeccionaremos técnicas ya aprendidas.

Inventario

- Cámara de incubación
- Etanol 70%
- Pipeta con pera de succión
- EPI
- Azul tripán
- Microscopio
- Cámara de recuento celular
- PBS para diluir la muestra
- Células de insectos
- Medio de cultivo

Procedimiento

En primer lugar nos ponemos los EPI necesarios y desinfectamos con alcohol la zona de trabajo.
Cogemos las células eucariotas que nos ha dado el profesor quien las alicotó, también suministra a cada grupo 50 ml de medio de cultivo.
Cuando conseguimos las células lo primero que hicimos fue ponerlas en el microscopio electrónico para ver la cantidad que había y así utilizar una mayor o menor cantidad de PBS para diluir y así facilitar el recuento. Vimos que había muchas células por lo que decidimos hacer una disolución de 10:100; es decir 10 microlitros de muestra y 100 microlitros de PBS.
Una vez hecho esto tuvimos que añadir el azul tripán para teñir las células y poder verlas al microscopio, para esto cogimos la misma cantidad de azul tripán que de PBS, otros 20 ml de cada cosa.
Una vez juntas las mezclamos un poco y la pusimos en una cámara de recuento celular, a continuación ponemos esta cámara en la platina del microscopio para realizar el recuento. Contamos los 4 cuadrados de cada esquina y luego dividimos entre 4 , saliendo una media de 17 células luego realizamos las cuentas para calcular la viabilidad de este cultivo.
Una vez hallado el numero de células vamos a la cabina de flujo laminar con las células eucariotas para suministrarle otra vez el PBS, para su posterior congelación y así poder mantenerlo


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